線粒體膜電位

一、服務介紹

　　大量的研究表明線粒體與細胞凋亡密切相關，其中線粒體跨膜電位（MMP）的下降，被認為是細胞凋亡級聯(lián)反應過程中早發(fā)生的事件之一。它發(fā)生在細胞核凋亡特征（染色質濃縮、DNA斷裂）出現(xiàn)之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰，則細胞凋亡不可逆轉。

　　二、實驗原理

　　JC-1是一種碳氰化合物類陽離子熒光染料，可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細胞內以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在，分別處于不同的熒光發(fā)射峰。當JC-1濃度低或膜電位水平低時，主要以單體形式存在，激發(fā)波長為527nm，呈綠色熒光；當JC-1濃度升高或線粒體膜電位水平較高時，形成聚合物，發(fā)出紅色的熒光，激發(fā)波長為590nm。當細胞發(fā)生凋亡時，線粒體跨膜電位被去極化，JC-1從線粒體內釋放，紅光強度減弱，以單體的形式存在于胞質內發(fā)綠色熒光，根椐這一特征就可以檢測線粒體膜電位的變化。

　　三、實驗流程

　　1.細胞培養(yǎng)；

　　2.用適當?shù)姆椒ㄕT導細胞凋亡，同時設立陰性依照組合陽性對照組，收集細胞；

　　3.用PBS洗滌細胞三次，收集不多于1×106的細胞；

　　4.取100μL10×IncubationBuffer加900μL滅菌去離子水稀釋成1×IncubationBuffer，混勻并預熱至37℃；

　　5.吸取500μL1×IncubationBuffer，加入1μLJC-1，渦旋混勻配成JC-1工作液；

　　6.取500μLJC-1工作液將細胞均勻懸浮，37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育15~20min。

　　7.室溫離心（2000rpm,5min）收集細胞，用1×IncubationBuffer洗兩次；

　　8.吸取500μL10×IncubationBuffer重新懸浮細胞；

　　9.流式細胞儀檢測，分析。

　　四、客戶提供

　　細胞株(凍存株或培養(yǎng)好的細胞)，相關藥品或MMP檢測試劑盒（可代購）!

　　五、公司提供

　　實驗步驟、結果圖、數(shù)據(jù)結果和分析報告

　　實驗周期：1-2周，具體需要根據(jù)細胞生長情況及實驗內容而定。