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穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選實(shí)驗(yàn)

簡要描述：穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選實(shí)驗(yàn)：穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株（穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株）指在細(xì)胞中持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)特定基因或干擾特定基因表達(dá)。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細(xì)胞染色體上，使細(xì)胞長期穩(wěn)定表達(dá)該基因。

  • 更新時間：2024-05-06
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穩(wěn)轉(zhuǎn)株長用于基因研究方向，便于長期觀察和檢驗(yàn)基因?qū)τ诩?xì)胞功能以及蛋白的相互作用。

一般轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)方法：

用轉(zhuǎn)染質(zhì)?；虿《厩秩镜姆椒▽?gòu)建好的含靶基因的載體導(dǎo)入細(xì)胞，根據(jù)不同的基因載體中所含的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的試劑進(jìn)行篩選混合陽性克隆。在陽性混合克隆的基礎(chǔ)上，得到單細(xì)胞長出的陽性單克隆，繼而得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。

一般篩選方法：

1、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩(wěn)定細(xì)胞系

對大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較低。對于基因過表達(dá)，如果轉(zhuǎn)染效率達(dá)到40%，基因過表達(dá)尚可。但是對于基因干擾實(shí)驗(yàn)，對轉(zhuǎn)染效率要求遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于基因過表達(dá)，通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法滿足。

另外，質(zhì)粒游離于細(xì)胞質(zhì)中，很快降解，無法滿足較長時間的檢測項(xiàng)目；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低，穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建耗時耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。

2、病毒感染篩選穩(wěn)定細(xì)胞株

病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩(wěn)定細(xì)胞系篩選方法。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄、高效表達(dá)、宿主范圍廣，感染效率高，且與細(xì)胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩(wěn)定細(xì)胞株的理想載體。

 

服務(wù)內(nèi)容：1、穩(wěn)定：15代以內(nèi)細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)。

       2、迅速：一般控制在1個月以內(nèi)完成構(gòu)建。

       3、經(jīng)濟(jì)：價(jià)格實(shí)惠。

       4、質(zhì)量：對外源基因進(jìn)行嚴(yán)格鑒定。


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